Разработка методики количественного определения глицина в таблетках
С целью подтверждения возможности использования реакции а-аминокислот с 0,2 % водным раствором нингидрина в количественном анализе нами проведено количественное определение глицина в таблетках.
В соответствии с ФСП на глицин таблетки сублингвальные 0,1 г одна таблетка имеет состав:
- Глицин 0,1
- Метилцеллюлоза водорастворимая (марки МЦ 100) 0,001
- Магния стеарат 0,001
- Масса таблетки 0,102 г
Для количественного анализа 0,1 г (точная навеска) порошка из 20 растертых таблеток, помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в горячей воде, после охлаждения раствор доводят водой до метки и фильтруют через стеклянный фильтр № 3. При этом из раствора удаляют магния стеарат, снижающий интенсивность светопоглощения продукта нингидриновой реакции и, как следствие — воспроизводимость результатов анализа.
При приготовлении раствора глицина из таблеток в него, наряду с основным веществом (глицином), переходит водорастворимая метилцеллюлоза. Поэтому нами были изучены спектральные характеристики 0,1 % раствора метилцелпюлозы в условиях проведения реакции с водным раствором нингидрина: к 1 мл 0,1 % раствора метилцелпюлозы прибавляли 1,1 мл 0,2 % водного раствора нингидрина. Полученную смесь нагревают при температуре 120 °С в течение 20 мин, после чего продукт реакции разбавляют водой до 100 мл и, спустя 1 ч после начала реакции, определяли оптическую плотность исследуемого образца при длине волны 400 нм.
Установлено, что метилцеллюлоза в условиях проведения реакции не поглощает при длине волны 400 нм, а значит, её присутствие в растворе а-аминокислот не влияет на ход реакции с водным раствором нингидрина.
На этом основании нами предложена следующая методика проведения количественного анализа: к 1 мл полученного из навески таблеток глицина раствора прибавляют 1,1 мл 0,2 % водного раствора нингидрина и нагревают при температуре 120 °С в течение 20 мин. После полного охлаждения продукт разбавляют водой до 100 мл и через 1 ч после начала реакции определяют оптическую плотность при длине волны 400 нм на спектрофотометре в кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм.
Параллельно проводят реакцию свежеприготовленного 0,1 % раствора стандартного образца глицина с 0,2 % водным раствором нингидрина и определяют оптическую плотность в аналогичных условиях. Стандартный образец глицина получен многократной дробной кристаллизацией фармакопейного глицина из водно-этанольной смеси.
Содержание глицина в таблетках (X), % вычисляют по формуле:
Х=[Dx*mo*(100-W)*100%]/[Do*mx*100]
Dx — оптическая плотность продукта реакции 0,1 % раствора глицина, приготовленного из таблеток, с 0,2 % водным раствором нингидрина;
D0 — оптическая плотность продукта реакции 0,1 % раствора стандартного образца глицина с 0,2 % водным раствором нингидрина;
m0 и mх — средние массы навесок стандартного образца глицина и глицина из растёртых таблеток, соответственно, г;
W- остаточная влажность субстанции стандартного образца глицина (0,1 %); На основании проведённых шести параллельных испытаний получены результаты, которые приведены в таблице 9.
Таблица 9. Результаты количественного определения глицина в таблетках
| № эксперимента | Навеска глицина в растертых таблетках, г | Навеска стандартного глицина, г | Оптическая плотность при λ = 400 нм продукта реакции | Содержание глицина в таблетках, % | |
| глицина из таблеток | Стандартного глицина | ||||
| 1 | 0,00098 | 0,00099 | 0,45 | 0,46626 | 97,4 |
| 2 | 0,00099 | 0,000995 | 0,4545 | 0,46188 | 98,8 |
| 3 | 0,000994 | 0,00101 | 0,45655 | 0,46717 | 99,2 |
| 4 | 0,00099 | 0,001 | 0,45879 | 0,46552 | 99,45 |
| 5 | 0,000995 | 0,00102 | 0,45941 | 0,4719 | 99,7 |
| 6 | 0,001 | 0,00103 | 0,45745 | 0,46976 | 100,2 |
Нами проведена статистическая обработка результатов количественного определения глицина в таблетках в соответствии с ГФ XI (табл. 10).
Таблица 10. Статистическая обработка результатов количественного определения глицина в таблетках
| f | <х>, % | s2* | S | Р,% | t(P,f) | t„bI4(P,f) | Ах | €,% |
| 5 | 99,13 | 0,93575 | 0,9673 | 95 | 2,57 | 2,2 | 2,49 | 2,51 |
В соответствии с ФСП допустимые нормы отклонений в количественном содержании глицина в таблетках составляют ±10 %. На основании данных таблицы 10 видно, что все полученные результаты соответствуют допустимым нормам отклонений, а среднее значение количественного содержания глицина в таблетках составляет 99,13 %, что говорит о достаточно высокой точности метода. Кроме того, разработанный метод характеризуется достаточно высокой воспроизводимостью, относительная ошибка результата отдельного определения составила ±2,51 %. Метод не требует дорогостоящего оборудования и реактивов и доступен для большинства лабораторий, что обуславливает перспективность его использования в количественном анализе a-аминокислот в лекарственных препаратах.
